Jogo diagnóstico ácido nucleico novo de Coronavirus (2019-nCoV)
(Sondagem da PCR-fluorescência)
Uso pretendido
O jogo diagnóstico ácido nucleico de Coronavirus da novela (2019-nCoV) (sondagem da PCR-fluorescência) é usado para a detecção qualitativa dos genes de ORF1ab e de N do coronavirus novo (2019-nCoV) no cotonete nasopharyngeal, cotonete orofaríngeo, alveolar lava o líquido, o escarro, o soro, sangue inteiro e fezes dos casos suspeitados da pneumonia com infecção nova do coronavirus, pacientes com os conjuntos suspeitados de infecção nova do coronavirus, e outros pacientes que exigem o diagnóstico ou o diagnóstico diferencial da infecção nova do coronavirus.
Para in vitro o uso diagnóstico somente. Para o uso profissional somente.
Sumário
As definições “de casos suspeitados” e “suspeitaram que os conjuntos de pacientes” estarão definidos com referência da “ao diagnóstico pneumonia e ao programa de tratamento para a infecção nova de Coronavirus” e da “o programa de monitorização do caso pneumonia para a infecção nova de Coronavirus” emitida por CDC de China (o currentversion).
Coronavirus que novo (2019-nCoV) o jogo diagnóstico ácido nucleico (sondagem da PCR-fluorescência) é usado somente para o diagnóstico auxiliar de argumentos relacionados e a reserva da emergência para in vitro o diagnóstico durante a manifestação da pneumonia de infecção nova de Coronavirus (2019-nCoV) desde December2019, este jogo não deve ser usado como a rotina in vitro diagnóstica na prática clínica.
Siga por favor as exigências relevantes da “do diagnóstico pneumonia e do programa de tratamento para a infecção nova de Coronavirus”, da “a prevenção pneumonia e o programa de controle para a infecção nova de Coronavirus” e os outros documentos no uso.
Os testes ácidos nucleicos novos de Coronavirus devem cumprir com “as diretrizes técnicas para testes de laboratório de Coronavirus novo no CDC de China” e manter a boa seguridade biológica.
Princípio do teste
Aplicando a tecnologia quantitativa da fluorescência RT-PCR do tempo real no instrumento quantitativo do PCR da fluorescência, este teste utiliza o coronavirus novo (2019-nCoV) ORF1ab e a sequência conservada específica de codificar o gene da proteína N do nucleocapsid como as regiões do alvo que são projetadas para a sequência conservada dos genes do dobro-alvo, para conseguir a detecção de RNA da amostra através das mudanças fluorescentes do sinal.
O sistema de detecção do PCR usa o controle interno positivo, que monitora a presença de inibidores do PCR em espécimes do teste detectando se o sinal de controle interno é normal, para evitar um resultado do falso negativo.
Componentes do jogo diagnóstico
Este jogo é um reagente da reação da amplificação e contém os seguintes componentes:
| Não. |
Nome do reagente |
Especs. & Qty |
Ingredientes principais |
| 24 T |
48 T |
| 1 |
mistura 2019-nCov-PCR |
624µL/tube x 1 |
1248µL/tube x 1 |
Premiers (4,62%), pontas de prova (1,15%), dNTPs (3,85%), MgCl2 (0,77%), Rnasin (0,48%),
Amortecedor do PCR (89,13%)
|
| 2 |
mistura 2019-nCov-PCR-Enzyme |
96µL/tube x 1 |
192µL/tube x 1 |
Enzima do RT (62,5%),
Enzima de Taq (37,5%)
|
| 3 |
controle 2019-nCov-PCR-Positive |
500µL/tube x 1 |
500µL/tube x 1 |
In vitro RNA transcricional que contém os genes do alvo (gene de ORF1 ab, de N) e fragmentos padrão internos do gene (Rnase P) |
| 4 |
controle 2019-nCov-PCR-Negative |
500µL/tube x 1 |
500µL/tube x 1 |
Salino normal |
Exigências do espécime
1. Tipo aplicável do espécime: o cotonete nasopharyngeal, cotonete orofaríngeo, alveolar lava o líquido, o escarro, o soro, o sangue inteiro e a fezes.
2. Coleção do espécime
Cotonete Nasopharyngeal/cotonete orofaríngeo: Recolha a amostra de acordo com as disposições relevantes do " do método de coleção espécime” da “no guia técnico do laboratório pneumonia para a infecção nova de Coronavirus” da “da prevenção pneumonia e do plano do controle para a infecção nova de Coronavirus”. Mostra-se que o cotonete fez da cabeça de preparação de amostras de nylon e haste da amostra do ABS pode ser selecionado para a coleção da amostra.
Cotonete Nasopharyngeal: O tubo da coleção de espécime deve ser colado com o código de barras primeiramente, o cotonete nasopharyngeal deve ser within3 recolhido dias após o início da doença na medida do possível. Use o cotonete para medir o comprimento entre o nasi do vértice e o lóbulo da orelha, a seguir identificar por meio de dedo. Introduza o cotonete na cavidade nasal no sentido da perpendicular ao nariz (cara). O cotonete deve ser introduzido pelo menos parcialmente do comprimento do lóbulo da orelha ao nasi do vértice. Faça as paradas do cotonete no for15 nasal ~ 30 s, delicadamente rotate3 ~ 5 vezes, põem rapidamente o cotonete no amortecedor do Lysis do tubo cotaining2 ml da coleção de espécime (mesmo que o amortecedor do Lysis no reagente da liberação da amostra) ou provam o reagente do armazenamento que contém o inibidor de enzima do RNA. Introduza o cotonete, quebre então a haste estéril do cotonete perto da parte superior, para apertar o tampão do tubo e o selo com filme da selagem.
Cotonete orofaríngeo: O tubo da coleção de espécime deve ser colado com o código de barras primeiramente, o cotonete orofaríngeo deve ser recolhido no prazo de 3 dias após o início da doença na medida do possível. Um cotonete de congregação estéril deve ser usado para a amostra, limpa moderadamente a parede pharyngeal traseiro, evita tocar na língua. Rapidamente lugar um cotonete estéril no tubo da coleção usado para a coleção do cotonete orofaríngeo. Quebre a haste estéril do cotonete perto da parte superior, aperte o tampão do tubo e o selo com filme da selagem.
Alveolar lave o líquido: Pacientes severos ou pacientes com pneumonia que progresso rapidamente. Clínico extract≥5ml BALF em um recipiente 50ml asséptico etiquetado com código de barras da amostra e tampão de parafuso pela operação asséptica. Recolha o espécime, a seguir aperte o tampão do tubo e o selo com filme da selagem.
Escarro:
O tubo da coleção de espécime deve ser colado com o código de barras primeiramente. Não abra a via aérea para recolher espécimes ao recolher o escarro. Escarro da tosse de Collect.deep em um copo de preparação de amostras asséptico descartável com tampão de parafuso, carga protease K de 2 mL (1g/L) em provar o copo. Recolha o escarro, a seguir aperte o tampão do tubo e o selo com filme da selagem. Envie à detecção dentro do minuto 30 na medida do possível. O Protease K não deve ser adicionado primeiramente se os espécimes precisam de ser transportados sobre distâncias longas.
Sangue inteiro:
As amostras de sangue podem ser recolhidas no prazo de 7 dias após o início ou os pacientes críticos, ou os pacientes considerados com viremia. O tubo da coleção de espécime deve ser colado com o código de barras primeiramente. Recolha 2~4ml de amostras de sangue no tubo da coleção do sangue do vácuo que contém o anticoagulante do EDTA.
Fezes:
Para pacientes com sintomas gastrintestinais tais como a diarreia na fase inicial da doença, fezes da conserva 3~5g (tamanho do feijão de soja). O tubo da coleção de espécime deve ser colado com o código de barras primeiramente. Recolha a amostra no tubo da coleção de espécime com o tampão de parafuso que contém (o inibidor de enzima do RNA pode ser adicionado quando as circunstâncias permitem) então o selo 2ml salino normal com filme da selagem.
Após a coleção da amostra, recomenda-se colocar no reagente do armazenamento da amostra para a preservação.
Mostrou-se que a solução da preservação, tal como salino normal, amortecedor de TE, guanidine de contenção de 2-4M (tal como o hidrocloro do guanidine) pode igualmente ser usada como o reagente do armazenamento da amostra para a preservação da amostra. O reagente do armazenamento da amostra que contém o guanidine não pode diretamente ser adaptado para provar o reagente da liberação fabricado por Sansure Biotech Inc. para a extração ácida nucleica. Caso necessário, recomenda-se usar a extração do ácido nucleico (DNA/RNA) ou o jogo da purificação (método magnético) dos grânulos (número de referência: S1002E) fabricado por Sansure Biotech Inc. ou o RNA viral Mini Kit de QIAamp (50) fabricado por QIAGEN para a extração ácida nucleica.
3. Armazenamento e entrega dos espécimes:
Os espécimes a ser testados podem imediatamente ser processados, os espécimes a ser testados dentro de 24 horas podem ser armazenados em 4℃. Os espécimes que não podem ser detectados dentro de 24 horas devem ser armazenados em -70℃ ou abaixo (na ausência das condições de armazenamento de -70℃, os espécimes a ser testados podem ser armazenados em -20℃ por 10 dias, ácido nucleico podem ser armazenados em -20±5℃ por 15 dias). Os ciclos múltiplos do gelo/aproximação amigável devem ser evitados. Os espécimes devem ser transportados em um jarro congelado selado com gelo ou em uma caixa selada da espuma com gelo. A inativação das amostras em 56℃ para 30min não afetará a detecção deste jogo.
Análise do resultado (refira o manual do usuário do instrumento para ajustar os ajustes.)
Os resultados salvar automaticamente quando as reações são terminadas. Analise a curva da amplificação do alvo da detecção e do controle interno. Ajuste valores do começo, do fim e de ponto inicial da linha de base do gráfico de acordo com o resultado da análise (os usuários podem ajustar os valores de acordo com a situação real. O valor do começo pode ser ajustado entre 3-15, e valor do fim entre 5-20. Ajuste a curva da amplificação do controle negativo para ser plano ou abaixo do ponto inicial). Clique “para analisar” para executar a análise, certifique-se de cada parâmetro satisfazer as exigências dadas da “no controle qualidade”. Vá à janela da “placa” gravar resultados qualitativos.
Controle da qualidade
| Artigo |
controle 2019-nCoV-PCR-Negative |
controle 2019-nCoV-PCR-Positive |
| Valor do Ct |
Nenhum Ct ou Ct > 40 no canal FAM, ROX e PARA ENCANTAR
(Controle interno)
|
≤ 35 no canal FAM, ROX e PARA ENCANTAR
(Controle interno)
|
O resultado da análise está tratado como válido se todas as condições no acima mencionado são estadas conformes para o mesmo teste. Se não o resultado da análise é tratado como inválido e precisa de ser reexaminado.
Explicação do resultado da detecção
| Conclusão |
Resultados da amplificação |
| positivo 2019-nCoV |
Há curva típica da amplificação da S-forma detectada no canal de FAM e/ou de ROX, e a curva que é detectada no canal HEX, Ct≤40 da amplificação. |
| negativo 2019-nCoV |
Não há nenhuma curva típica da amplificação da S-forma (nenhum Ct) ou Ct > 40 detectados no canal de FAM e de ROX, e a curva que é detectada no canal HEX, ≤ 40 da amplificação do Ct. |
Não há nenhuma curva típica da amplificação da S-forma detectada em FAM, ROX e ENCANTA o canal (nenhum Ct), ou o Ct > 40. Indica-se que a concentração do espécime é demasiado baixa, ou há as substâncias de interferência que inibem a reação. O resultado da análise é inválido. Uma investigação deve ser executada para encontrar e excluir as razões, recolhe por favor o espécime outra vez e reexamina os espécimes.
Nota: Para culturas do vírus, não há nenhuma exigência para resultados da análise do controle interno.
Armazenamento e estabilidade
1. O jogo diagnóstico deve ser armazenado em um malote selado at-20±5°C e ser protegido da luz. O jogo é provisoriamente válido por 6 meses.
2. Refira por favor a data da data de fabricação e de expiração no pacote exterior.
3. Os reagentes mantêm-se válido e estável dentro da data de expiração se não usou-se. Contanto que o recipiente do reagente for aberto, o gelo/ciclos da aproximação amigável não deve exceder três.
Instrumento compatível
O jogo diagnóstico é aplicável a SLAN-96P, ABI7500, Life Technologies QuantStudio TM5, RocheCobas480, instrumentodoPCRMA-6000.
Por favor verifique seu email!
