Sondagem ácida nucleica nova da PCR-fluorescência do jogo da detecção de COVID-19 Coronavirus (2019-NCoV)
Jogo diagnóstico ácido nucleico novo de Coronavirus (2019-nCoV)
(Sondagem da PCR-fluorescência)
Uso pretendido
O jogo diagnóstico ácido nucleico de Coronavirus da novela (2019-nCoV) (sondagem da PCR-fluorescência) é usado para a detecção qualitativa dos genes de ORF1ab e de N do coronavirus novo (2019-nCoV) no cotonete nasopharyngeal, cotonete orofaríngeo, alveolar lava o líquido, o escarro, o soro, sangue inteiro e fezes dos casos suspeitados da pneumonia com infecção nova do coronavirus, pacientes com os conjuntos suspeitados de infecção nova do coronavirus, e outros pacientes que exigem o diagnóstico ou o diagnóstico diferencial da infecção nova do coronavirus.
Para in vitro o uso diagnóstico somente. Para o uso profissional somente.
Sumário
As definições “de casos suspeitados” e “suspeitaram que os conjuntos de pacientes” estarão definidos com referência da “ao diagnóstico pneumonia e ao programa de tratamento para a infecção nova de Coronavirus” e da “o programa de monitorização do caso pneumonia para a infecção nova de Coronavirus” emitida por CDC de China (o currentversion).
Coronavirus que novo (2019-nCoV) o jogo diagnóstico ácido nucleico (sondagem da PCR-fluorescência) é usado somente para o diagnóstico auxiliar de argumentos relacionados e a reserva da emergência para in vitro o diagnóstico durante a manifestação da pneumonia de infecção nova de Coronavirus (2019-nCoV) desde December2019, este jogo não deve ser usado como a rotina in vitro diagnóstica na prática clínica. Siga por favor as exigências relevantes da “do diagnóstico pneumonia e do programa de tratamento para a infecção nova de Coronavirus”, da “a prevenção pneumonia e o programa de controle para a infecção nova de Coronavirus” e os outros documentos no uso.
Os testes ácidos nucleicos novos de Coronavirus devem cumprir com “as diretrizes técnicas para testes de laboratório de Coronavirus novo no CDC de China” e manter a boa seguridade biológica.
Princípio do teste
Aplicando a tecnologia quantitativa da fluorescência RT-PCR do tempo real no instrumento quantitativo do PCR da fluorescência, este teste utiliza o coronavirus novo (2019-nCoV) ORF1ab e a sequência conservada específica de codificar o gene da proteína N do nucleocapsid como as regiões do alvo que são projetadas para a sequência conservada dos genes do dobro-alvo, para conseguir a detecção de RNA da amostra através das mudanças fluorescentes do sinal.
O sistema de detecção do PCR usa o controle interno positivo, que monitora a presença de inibidores do PCR em espécimes do teste detectando se o sinal de controle interno é normal, para evitar um resultado do falso negativo.
Componentes do jogo diagnóstico
Este jogo é um reagente da reação da amplificação e contém os seguintes componentes:
Nota:
1. Não misture nem não troque componentes dos lotes diferentes do jogo.
2. Todas as amostras biológicas no jogo diagnóstico foram neutralizadas.
3. Materiais exigidos mas não fornecidos: 1.5ml DNase-livre e tubos de centrifugador RNase-livres, tubos da reação do PCR 0.2ml, pontas da pipeta (10μL, as pontas 200μL and1000μL com filtros são preferidos), centrifugador desktop, vários modelos do misturador desktop do redemoinho de armas da pipeta.
4. reagente Auto-preparado: Reagente da liberação da amostra (número de referência: S1014E) ou reagente da liberação da amostra (número de referência: S1015E extração) ou do ácido nucleico (DNA/RNA) ou jogo da purificação (método magnético) dos grânulos (número de referência: S1002E) fabricado por Sansure Biotech Inc. ou pelo RNA viral Mini Kit de QIAamp (50) fabricado por QIAGEN. Reagente do armazenamento da amostra, tal como o reagente do armazenamento da amostra (número de referência: X1002E) fabricado por Sansure Biotech Inc.
Instrumento compatível
O jogo diagnóstico é aplicável a SLAN-96P, ABI7500, Life Technologies QuantStudio TM5, RocheCobas480, instrumentodoPCRMA-6000.
Exigências do espécime
1. Tipo aplicável do espécime: o cotonete nasopharyngeal, cotonete orofaríngeo, alveolar lava o líquido, o escarro, o soro, o sangue inteiro e a fezes.
2. Coleção do espécime
Cotonete Nasopharyngeal/cotonete orofaríngeo: Recolha a amostra de acordo com as disposições relevantes do " do método de coleção espécime” da “no guia técnico do laboratório pneumonia para a infecção nova de Coronavirus” da “da prevenção pneumonia e do plano do controle para a infecção nova de Coronavirus”. Mostra-se que o cotonete fez da cabeça de preparação de amostras de nylon e haste da amostra do ABS pode ser selecionado para a coleção da amostra.
Cotonete Nasopharyngeal:
O tubo da coleção de espécime deve ser colado com o código de barras primeiramente, o cotonete nasopharyngeal deve ser within3 recolhido dias após o início da doença na medida do possível. Use o cotonete para medir o comprimento entre o nasi do vértice e o lóbulo da orelha, a seguir identificar por meio de dedo. Introduza o cotonete na cavidade nasal no sentido da perpendicular ao nariz (cara). O cotonete deve ser introduzido pelo menos parcialmente do comprimento do lóbulo da orelha ao nasi do vértice. Faça as paradas do cotonete no for15 nasal ~ 30 s, delicadamente rotate3 ~ 5 vezes, põem rapidamente o cotonete no amortecedor do Lysis do tubo cotaining2 ml da coleção de espécime (mesmo que o amortecedor do Lysis no reagente da liberação da amostra) ou provam o reagente do armazenamento que contém o inibidor de enzima do RNA. Introduza o cotonete, quebre então a haste estéril do cotonete perto da parte superior, para apertar o tampão do tubo e o selo com filme da selagem.
Cotonete orofaríngeo:
O tubo da coleção de espécime deve ser colado com o código de barras primeiramente, o cotonete orofaríngeo deve ser recolhido no prazo de 3 dias após o início da doença na medida do possível. Um cotonete de congregação estéril deve ser usado para a amostra, limpa moderadamente a parede pharyngeal traseiro, evita tocar na língua. Rapidamente lugar um cotonete estéril no tubo da coleção usado para a coleção do cotonete orofaríngeo. Quebre a haste estéril do cotonete perto da parte superior, aperte o tampão do tubo e o selo com filme da selagem.
Alveolar lave o líquido:
Pacientes severos ou pacientes com pneumonia que progresso rapidamente. Clínico extract≥5ml BALF em um recipiente 50ml asséptico etiquetado com código de barras da amostra e tampão de parafuso pela operação asséptica. Recolha o espécime, a seguir aperte o tampão do tubo e o selo com filme da selagem.
Escarro:
O tubo da coleção de espécime deve ser colado com o código de barras primeiramente. Não abra a via aérea para recolher espécimes ao recolher o escarro. Escarro da tosse de Collect.deep em um copo de preparação de amostras asséptico descartável com tampão de parafuso, carga protease K de 2 mL (1g/L) em provar o copo. Recolha o escarro, a seguir aperte o tampão do tubo e o selo com filme da selagem. Envie à detecção dentro do minuto 30 na medida do possível. O Protease K não deve ser adicionado primeiramente se os espécimes precisam de ser transportados sobre distâncias longas.
Sangue inteiro:
As amostras de sangue podem ser recolhidas no prazo de 7 dias após o início ou os pacientes críticos, ou os pacientes considerados com viremia. O tubo da coleção de espécime deve ser colado com o código de barras primeiramente. Recolha 2~4ml de amostras de sangue no tubo da coleção do sangue do vácuo que contém o anticoagulante do EDTA.
Fezes:
Para pacientes com sintomas gastrintestinais tais como a diarreia na fase inicial da doença, fezes da conserva 3~5g (tamanho do feijão de soja). O tubo da coleção de espécime deve ser colado com o código de barras primeiramente. Recolha a amostra no tubo da coleção de espécime com o tampão de parafuso que contém (o inibidor de enzima do RNA pode ser adicionado quando as circunstâncias permitem) então o selo 2ml salino normal com filme da selagem.
Após a coleção da amostra, recomenda-se colocar no reagente do armazenamento da amostra para a preservação.
Mostrou-se que a solução da preservação, tal como salino normal, amortecedor de TE, guanidine de contenção de 2-4M (tal como o hidrocloro do guanidine) pode igualmente ser usada como o reagente do armazenamento da amostra para a preservação da amostra. O reagente do armazenamento da amostra que contém o guanidine não pode diretamente ser adaptado para provar o reagente da liberação fabricado por Sansure Biotech Inc. para a extração ácida nucleica. Caso necessário, recomenda-se usar a extração do ácido nucleico (DNA/RNA) ou o jogo da purificação (método magnético) dos grânulos (número de referência: S1002E) fabricado por Sansure Biotech Inc. ou o RNA viral Mini Kit de QIAamp (50) fabricado por QIAGEN para a extração ácida nucleica.
3. Armazenamento e entrega dos espécimes:
Os espécimes a ser testados podem imediatamente ser processados, os espécimes a ser testados dentro de 24 horas podem ser armazenados em 4℃. Os espécimes que não podem ser detectados dentro de 24 horas devem ser armazenados em -70℃ ou abaixo (na ausência das condições de armazenamento de -70℃, os espécimes a ser testados podem ser armazenados em -20℃ por 10 dias, ácido nucleico podem ser armazenados em -20±5℃ por 15 dias). Os ciclos múltiplos do gelo/aproximação amigável devem ser evitados. Os espécimes devem ser transportados em um jarro congelado selado com gelo ou em uma caixa selada da espuma com gelo. A inativação das amostras em 56℃ para 30min não afetará a detecção deste jogo.
Controle da qualidade
O resultado da análise está tratado como válido se todas as condições no acima mencionado são estadas conformes para o mesmo teste. Se não o resultado da análise é tratado como inválido e precisa de ser reexaminado.
Escala de referência
Com a pesquisa sobre valores de referência, o valor de referência do Ct do gene do alvo é determinado ser 40, o valor de referência do Ct do controle interno é determinado ser 40.
Explicação do resultado da detecção
Não há nenhuma curva típica da amplificação da S-forma detectada em FAM, ROX e ENCANTA o canal (nenhum Ct), ou o Ct > 40. Indica-se que a concentração do espécime é demasiado baixa, ou há as substâncias de interferência que inibem a reação. O resultado da análise é inválido. Uma investigação deve ser executada para encontrar e excluir as razões, recolhe por favor o espécime outra vez e reexamina os espécimes.
Armazenamento e estabilidade
1. O jogo diagnóstico deve ser armazenado em um malote selado at-20±5°C e ser protegido da luz. O jogo é provisoriamente válido por 6 meses.
2. Refira por favor a data da data de fabricação e de expiração no pacote exterior.
3. Os reagentes mantêm-se válido e estável dentro da data de expiração se não usou-se. Contanto que o recipiente do reagente for aberto, o gelo/ciclos da aproximação amigável não deve exceder três.
Por favor verifique seu email!
