Jogo diagnóstico ácido nucleico novo de Coronavirus (2019-nCoV)
(Sondagem da PCR-fluorescência)
Uso pretendido
O jogo diagnóstico ácido nucleico de Coronavirus da novela (2019-nCoV) (sondagem da PCR-fluorescência) é usado para a detecção qualitativa dos genes de ORF1ab e de N do coronavirus novo (2019-nCoV) no cotonete nasopharyngeal, cotonete orofaríngeo, alveolar lava o líquido, o escarro, o soro, sangue inteiro e fezes dos casos suspeitados da pneumonia com infecção nova do coronavirus, pacientes com os conjuntos suspeitados de infecção nova do coronavirus, e outros pacientes que exigem o diagnóstico ou o diagnóstico diferencial da infecção nova do coronavirus.
Para in vitro o uso diagnóstico somente. Para o uso profissional somente.
Princípio do teste
Aplicando a tecnologia quantitativa da fluorescência RT-PCR do tempo real no instrumento quantitativo do PCR da fluorescência, este teste utiliza o coronavirus novo (2019-nCoV) ORF1ab e a sequência conservada específica de codificar o gene da proteína N do nucleocapsid como as regiões do alvo que são projetadas para a sequência conservada dos genes do dobro-alvo, para conseguir a detecção de RNA da amostra através das mudanças fluorescentes do sinal.
O sistema de detecção do PCR usa o controle interno positivo, que monitora a presença de inibidores do PCR em espécimes do teste detectando se o sinal de controle interno é normal, para evitar um resultado do falso negativo.
Componentes do jogo diagnóstico
Este jogo é um reagente da reação da amplificação e contém os seguintes componentes:
| Não. |
Nome do reagente |
Especs. & Qty |
Ingredientes principais |
| 24 T |
48 T |
| 1 |
mistura 2019-nCov-PCR |
624µL/tube x 1 |
1248µL/tube x 1 |
Premiers (4,62%), pontas de prova (1,15%), dNTPs (3,85%), MgCl2 (0,77%), Rnasin (0,48%), amortecedor do PCR (89,13%) |
| 2 |
mistura 2019-nCov-PCR-Enzyme |
96µL/tube x 1 |
192µL/tube x 1 |
Enzima do RT (62,5%),
Enzima de Taq (37,5%)
|
| 3 |
controle 2019-nCov-PCR-Positive |
500µL/tube x 1 |
500µL/tube x 1 |
In vitro RNA transcricional que contém os genes do alvo (gene de ORF1 ab, de N) e fragmentos padrão internos do gene (Rnase P) |
| 4 |
controle 2019-nCov-PCR-Negative |
500µL/tube x 1 |
500µL/tube x 1 |
Salino normal |
Método do teste
Preparação do reagente (executado do “na região da preparação reagente ")
Remova cada componente do jogo diagnóstico e coloque-os na temperatura ambiente. Permita que os reagentes equilibrem na temperatura ambiente, a seguir no redemoinho cada um deles respectivamente para uso posterior.
De acordo com a quantidade de espécimes do teste, o controle 2019-nCoV-PCR-Positive e o controle 2019-nCoV-PCR-Negative, a quantidade apropriada da pipeta da mistura 2019-nCoV-PCR e a mistura 2019-nCoV-PCR-Enzyme (mistura 2019-nCoV-PCR mistura 4μL/test da PCR-enzima 26μL/test + 2019-nCoV-), misturam-nos completamente para fazer um PCR-Mastermix, centrifugam-no instantaneamente para uso posterior.
| Artigo |
1 amostra |
10 amostras |
24 amostras |
48 amostras |
| mistura 2019-nCoV-PCR (μL) |
26 |
260 |
624 |
1248 |
| mistura 2019-nCoV-PCR-Enzyme (μL) |
4 |
40 |
96 |
192 |
| Nota: A configuração acima é apenas para sua referência e para assegurar bastante volume do PCR-Mastermix, mais volume de introduzir com pipeta real pode ser exigido. |
Transfira os reagentes acima-preparados ao “espécime que processa a região” para uso posterior.
Amplificação do PCR (refira o manual do usuário de cada instrumento para ajustar os ajustes.)
Tubos da reação do PCR do lugar nos poços do espécime do equipamento da amplificação. Estabelecer o controle 2019-nCoV-PCR-Positive, o controle 2019-nCoV-PCR-Negative e os espécimes a ser testados no nome correspondente do espécime da sequência e da entrada.
Canal de teste seleto do PCR:
a. canais seletos de FAM (região de ORF-1ab) e de ROX (gene de N) para testar o ácido 2019-nCoV nucleico.
b. seleto ENCANTAR o canal para testar o controle interno.
Ajuste parâmetros do ciclo
| Não. |
Etapas |
Temperatura |
Tempo |
Ciclo não. |
| 1 |
Transcrição reversa |
50°C |
30 mínimos. |
1 |
| 2 |
predenaturation do cDNA |
95°C |
1 mínimo. |
1 |
| 3 |
Desnaturação |
95°C |
segundo 15. |
45 |
| Coleção do recozimento, da extensão e da fluorescência |
60°C |
30 sec.* |
| 4 |
Refrigerar do dispositivo |
25°C |
segundo 10. |
1 |
Quando os ajustes são terminados, salvar os ajustes e realize o procedimento da reação.
Análise do resultado (refira o manual do usuário do instrumento para ajustar os ajustes.)
Os resultados salvar automaticamente quando as reações são terminadas. Analise a curva da amplificação do alvo da detecção e do controle interno. Ajuste valores do começo, do fim e de ponto inicial da linha de base do gráfico de acordo com o resultado da análise (os usuários podem ajustar os valores de acordo com a situação real. O valor do começo pode ser ajustado entre 3-15, e valor do fim entre 5-20. Ajuste a curva da amplificação do controle negativo para ser plano ou abaixo do ponto inicial). Clique “para analisar” para executar a análise, certifique-se de cada parâmetro satisfazer as exigências dadas de “em um controle 5. qualidades”. Vá à janela da “placa” gravar resultados qualitativos.
Controle da qualidade
| Artigo |
controle 2019-nCoV-PCR-Negative |
controle 2019-nCoV-PCR-Positive |
| Valor do CT |
Nenhum Ct ou Ct > 40 no canal FAM, ROX e PARA ENCANTAR
(Controle interno)
|
≤ 35 no canal FAM, ROX e PARA ENCANTAR
(Controle interno)
|
O resultado da análise está tratado como válido se todas as condições no acima mencionado são estadas conformes para o mesmo teste. Se não o resultado da análise é tratado como inválido e precisa de ser reexaminado.
Escala de referência
Com a pesquisa sobre valores de referência, o valor de referência do Ct do gene do alvo é determinado ser 40, o valor de referência do CT do controle interno é determinado ser 40.
Explicação do resultado da detecção
| Conclusão |
Resultados da amplificação |
| positivo 2019-nCoV |
Há curva típica da amplificação da S-forma detectada no canal de FAM e/ou de ROX, e a curva que é detectada no canal HEX, Ct≤40 da amplificação. |
| negativo 2019-nCoV |
Não há nenhuma curva típica da amplificação da S-forma (nenhum Ct) ou Ct > 40 detectados no canal de FAM e de ROX, e a curva que é detectada no canal HEX, ≤ 40 da amplificação do Ct. |
Não há nenhuma curva típica da amplificação da S-forma detectada em FAM, ROX e ENCANTA o canal (nenhum Ct), ou o Ct > 40. Indica-se que a concentração do espécime é demasiado baixa, ou há as substâncias de interferência que inibem a reação. O resultado da análise é inválido. Uma investigação deve ser executada para encontrar e excluir as razões, recolhe por favor o espécime outra vez e reexamina os espécimes.
Nota: Para culturas do vírus, não há nenhuma exigência para resultados da análise do controle interno.
Índice do desempenho de produto
Precisão
A referência positiva da empresa do teste, os resultados é tudo positiva.
Especificidade
Para o jogo diagnóstico ácido nucleico novo de Coronavirus (2019-nCoV) (sondagem da PCR-fluorescência), não há igualmente nenhuma reação cruzada com coronavirus (NL63, HKU1, 229E, OC43), coronavirus do SARS, coronavirus de MERS, gripe um vírus, tipo Yamagata do vírus da gripe B e tipo Victoria, vírus da gripe A (H1N1), vírus da gripe A (H3N2), vírus da gripe A (H5N1), vírus da gripe A (H7N9), tipo syncytial respiratório A do vírus e tipo B, tipo nasal A do vírus, tipo B e tipo C, tipo do vírus adenoide 1, 2, 3, 4, 5, 7 e 55, o tipo do vírus de Parainfluenza -1, 2 e 3, tipo intestinal A do vírus, tipo B, tipo C (EV-C95), tipo D (EV-D70), vírus pulmonar parcial, vírus humano do pulmão, neoformans do cryptococcus, estreptococo pyogenic, baumannii da ácinobactéria, carinii dos pneumocystis, pneumoniae do klebsiella, estreptococo pneumoniae, hemophilus - influenzae, pseudomonas - aeruginosa, pneumophilia do legionella, Bordetella Pertussis, estafilococo - áureo, pneumoniae pneumonia do mycoplasma, estreptococo pneumoniae, pneumoniae do klebsiella, clamídia, vírus do EB, vírus humano do cytomegalo, fumigatus do aspergilo, albicans da candida, glabrata da candida, tuberculose de mycobacterium, mycobacterium não-tuberculoso, norovirus, rotavirus, vírus do zoster do varicella, vírus de sarampo, vírus de papeira, ADN do genoma humano amostras positivas etc. Teste a referência negativa da empresa, o resultado são tudo negativo.
Precisão:
O coeficiente de variação (CV%) do valor do CT da precisão da dentro-corrida é ≤5%.
A avaliação clínica é baseada no recomenda o método “do guia novo da tecnologia dos testes de laboratório da pneumonia da infecção de Coronavirus”, da “o programa de monitoração dos casos da pneumonia da infecção de Coronavirus novela (segunda edição)” ao diagnóstico/resultado da exclusão como uma comparação, no Cademy militar do instituto de pesquisa médica militar, controlo de enfermidades de Hunan e centro da prevenção, o hospital do pessoa da província de Hunan, hospital central de Xiangya da universidade sul ò, de acordo com os dados clínicos recolhidos das quatro instituições, tais como a análise estatística, a avaliação preliminar, clínico básico confirmou o desempenho de produto pode encontrar as necessidades da emergência. Os tipos de amostras para a avaliação clínica incluíram cotonetes pharyngeal e alveolar lave. Uns dados clínicos mais adicionais serão recolhidos após o mercado para confirmar o desempenho clínico do produto.
Devido às características do cotonete e do outro processo próprio do processo da coleção da amostra e a viral da infecção, resultados do falso negativo pode ser causada pelo insuficiente volume de amostra, que deve ser combinado com o outro diagnóstico e informação clínicos do tratamento para o julgamento detalhado, a contraprova quando necessária.
Armazenamento e estabilidade
O jogo diagnóstico deve ser armazenado em um malote selado at-20±5°C e ser protegido da luz. O jogo é provisoriamente válido por 6 meses.
Refira por favor a data da data de fabricação e de expiração no pacote exterior.
Os reagentes mantêm-se válido e estável dentro da data de expiração se não usou-se. Contanto que o recipiente do reagente for aberto, o gelo/ciclos da aproximação amigável não deve exceder três.
Instrumento compatível
O jogo diagnóstico é aplicável a SLAN-96P, ABI7500, Life Technologies QuantStudio TM5, RocheCobas480, instrumentodoPCRMA-6000.
Por favor verifique seu email!
